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胶原蛋白代加工_胶原蛋白肽

来源:未知 编辑:oemodmdaijiagong 时间:2018-03-23
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湖南康琪壹佰生物科技有限公司 
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OEM加工贴牌合作方式:
①客户自带品牌并提供包装材料,其余保健食品代加工厂提供(如配方、产品加工等)。
②客户自带品牌、包装材料和产品配方,保健食品代加工厂提供原料及产品加工。
③保健食品代加工厂为客户从注册品牌到产品加工提供一条龙服务。
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产品介绍
品名:胶原蛋白
品级:食字号
成分:工厂提供成熟配方或根据客户要求定制调配
规格:  多种规格选择,可按要求定制加工
包装:工厂提供包装设计或由客户提供
单价:面议
胶原蛋白外观透明、光润,口感一般柔软黏糯、富有弹性,而且具有不粘牙等优点深受人们的喜爱,但是胶原蛋白具有一定的粘性和亲水性,一般的胶原蛋白包有糯米纸或灌装于包装袋中,一定程度上影响了口感,同时易弄脏手,给顾客食用带来一定的麻烦。现有的胶原蛋白成分单一过于注重口感,其营养含量成分少。
一种类人胶原蛋白及通过基因工程菌生产类人胶原蛋白的方法。
胶原蛋白是人体固有蛋白之一,它在皮肤里的含量最多,由于胶原蛋白固有的生物兼容性、生物降解性和吸收性、促新细胞形成及促上皮细胞形成功能,胶原蛋白在医学领域、美容、化妆品、保健品行业的潜在用途不断拓宽,但是,动物体胶原蛋白是一种硬蛋白(水不溶),并且随着年龄的增长,内部双键越来越多,同时也越来越硬。一般,经酶解获得的胶原蛋白为水不溶性蛋白,也不可能在不改变分子量情况下重溶解。因此,可加工性能很弱,直接限制了许多潜在用途的开发。另外,来自动物体的胶原蛋白不可能排除病毒隐患,同时始终带有牛胶原的特性,为了降低其免疫排异反应,科学家们曾想法从人胎盘中获取胶原蛋白,但是,该研究受到世界人权组织及FDA的阻力,因为,不能确切检测每个胎盘组织的病毒和细菌。
在现有技术中,国内外市场小批量胶原蛋白的生产均来自动物皮、跟腱、软骨和人胎盘的提取物。其提取工艺分三步,一、溶解;二、酶处理;三、纯化。但通过动物皮提取类胶原蛋白可能带有各种病毒,因此动物皮及脏器提取物的各种产品直接用于人体会造成严重隐患。
国外报道用重组技术生产胶原蛋白研究有重组酵母细胞生产准人胶原蛋白II,重组哺乳动物细胞生产准人胶原蛋白I,II,III型,重组啤酒酵母细胞生产准人胶原蛋白VI,重组昆虫细胞生产准人胶原蛋白II,表达量为50mg/ml,人肿瘤细胞生产准人纤维胶原1A1和1A2,由于动物细胞培养成本昂贵,周期长,一般15天甚至更长,另外培养规模只能限于实验规模,要满足产业化、大批量需求几乎是完全不可能。另外,这些重组类胶原蛋白都必须有后转化酶的参与,必须有一个后转化工艺,到目前为止,用重组动物细胞生产胶原蛋白必须8种后转化酶的参与,转化工艺相当复杂。
胶原蛋白是结缔组织中极其重要的一种结构蛋白,现已广泛应用于食品、化妆品、营养保健品、生物肥料以及医用材料等领域。它广泛存在于动物的骨、腱、肌鞘、韧带、肌膜、软骨和皮肤中。鱼鳞含有丰富的蛋白质和钙、磷等矿物质,主要由蛋白质和羟基磷灰石组成,其中蛋白质占鱼鳞总重的50%~70%,主要为胶原蛋白和角蛋白,可见鱼鳞是非常好的胶原蛋白生产原料。目前国外对从海洋鱼类鱼鳞中提取胶原蛋白的工艺已较成熟,其胶原蛋白的提取率达到了 25%~55%,并已运用于工业化生产。而国内有关鱼鳞中提取胶原蛋白的研究还处于起始阶段,刘庆慧等对鱼鳞中提取胶原蛋白进行了初步的研究。而对淡水鱼鱼鳞胶原蛋白的研究,仅有Kimura,S.对鲤鱼鱼鳞的提取及肽链组成进行了研究报道,且仍为采用传统的乙酸作提取剂,提取率不高。尚未实现工业化生产。
【发明内容】
[0003]本发明的目的在于针对目前在制备胶原蛋白过程中所存在的工艺复杂以及纯度不高的问题,提供一种制备高纯度胶原蛋白的新方法。
[0004]为实现上述目的,本发明采取的技术方案为:
一种胶原蛋白的制备方法,采用鱼鳞为原料,制备型高效液相色谱法制备高纯度胶原蛋白,它包括以下步骤:
(1)将鱼鳞洗净后,在酸性条件下,用胃蛋白酶酶解24h,调至中性,冻干,得胶原蛋白粗·品;
(2)用甲醇溶解胶原蛋白粗品,采用HPLC优化胶原蛋白的最佳分离洗脱条件,将其等比例放大,应用在填充十八烷基反相硅胶填料的动态轴向压缩柱上进行分离,在线收集胶原蛋白对应谱带的馏分;
(3)将步骤(2)中收集的对应谱带洗脱液减压干燥,即可得到色谱纯为99.5%的胶原蛋白。
[0005]本发明的有益效果是选用动态轴向压缩柱来制备胶原蛋白,过程简单、易控制,工艺技术简化,生产成本低,适用于大规模制备。高效液相色谱测定中,总杂质峰小于0.5%,单一杂质峰不超过0.3%。此产品完全符合欧洲药典标准。
【具体实施方式】
[0006]实施例1
1.将鱼鳞洗净后,在酸性条件下,用1%胃蛋白酶酶解(W/V)24h,调至中性,冻干,得胶原蛋白粗品;
2.将胶原蛋白粗品注入动态轴向压缩柱制备色谱系统,动态轴向压缩柱尺寸为Φ50X 250mm,十八烷基反相硅胶填料粒径为10 μ m,上样量500mg,流动相流速为80ml/min。分离初期,流动相甲醇与水体积比范围为30/70-85/15,洗脱60min后,流动相甲醇与水的体积比切换为95/5,洗脱至80min,使后端杂质冲洗出来,一个分离周期结束。采用的紫外光度检测器的检测波长为230nm,收集保留时间在43飞Omin的馏分,经HPLC分析纯度≥ 99.6%。
[0007]实施例2
1.将鱼鳞洗净后,在酸性条件下,用1%胃蛋白酶酶解(W/V)24h,调至中性,冻干,得胶原蛋白粗品;
2.将胶原蛋白粗品注入动态轴向压缩柱制备色谱系统,动态轴向压缩柱尺寸为Φ 50 X 250mm,十八烷基反相硅胶填料粒径为10 μ m,上样量lg,流动相流速为80ml/min。分离初期,流动相甲醇与水体积比范围为30/70-85/15,洗脱60min后,流动相甲醇与水的体积比切换为95/5,洗脱至80min,使后端杂质冲洗出来,一个分离周期结束。采用的紫外光度检测器的检测波长为230nm,收集保留时间在41.5^52min的馏分,经HPLC分析纯度≥ 99.5%。
[0008]实施例3
1.将鱼鳞洗净后,在酸性条件下,用1%胃蛋白酶酶解(W/V)24h,调至中性,冻干,得胶原蛋白粗品;
2.将胶原蛋白粗品注入动态轴向压缩柱制备色谱系统,动态轴向压缩柱尺寸为Φ 50 X 250mm,十八烷基反相硅胶填料粒径为10 μ m,上样量2g,流动相流速为100ml/min。分离初期,流动相甲醇与水体积比范围为40/60-90/10,洗脱60min后,流动相甲醇与水的体积比切换为95/5,洗脱至80min,使后端杂质冲洗出来,一个分离周期结束。采用的紫外光度检测器的检测波长为230nm,收集保留时间在4(T58min的馏分,经HPLC分析纯度≥ 99.5%。
【权利要求】
1.一种胶原蛋白的制备方法,其特征在于包括以下步骤: (1)将鱼鳞洗净后,在酸性条件下,用胃蛋白酶酶解24h,调至中性,冻干,得胶原蛋白粗品; (2)将过滤后的胶原蛋白粗品通过进样泵或者进样阀注入动态轴向压缩制备色谱系统; (3)采用甲醇和水做流动相,梯度洗脱,将色谱峰对应的流出液进行减压干燥,即可得到高纯度的胶原蛋白。
2.根据权利要求1所述的方法,其特征是:所述步骤(2)中,在制备色谱系统中,采用动态轴向压缩柱,规格为Φ50Χ250πιπ~Φ150Χ250πιπι,且所填充固定相为十八烷基反相硅胶填料,粒径为10 μ m~45 μ m。
3.根据权利要求1所述的方法,其特征是:所述步骤(3)中,梯度洗脱时,流动相甲醇与水的体积比(V/V)范围为3:7~ 9:1。


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